Practicas de bioquímica. Determinación de Glucosa.

octubre 21, 2008, 6:48 pm
Filed under: Farmacia

Estas practicas son muy interesantes y sobre todo fácilmente aplicables al análisis clínico. El primer día, ayer, se calcularon las concentraciones de reactivos, tampones y disolventes, así iniciamos las practicas. Hoy, se ha visto una técnica típica: Determinación de glucosa en suero, eso si, por el método GOD-POD. En rápidas palabras el método es el siguiente.

En primer lugar nos basamos en el uso de un espectofotómetro, por tanto de las propiedades de absorción de determinadas longitudes de onda por parte de una sustancia. No, la glucosa no, esta molécula no es indicada para medir la absorción, ¿y la oxidación de glucosa por la enzima glucosa oxidasa (GOD para los amigos) a ácido D-Glucónico?, no, tampoco es adecuado para métodos espectroscópicos. ¿Entonces? Bueno, una vez explicado resulta facil, en la reacción en la que participa la GOD un producto es el Peroxido de hidrogeno (agua oxigenada) la cual en presencia de otra enzima, la Peroxidasa se transforma en agua con la oxidación a la par de un cromógeno, la orto-dianisidina, este compuesto, sí es adecuado para estas técnicas colorímetras, teniendo un máximo de absorbancia a 440nm.

Espectrofotometro

La absorción, antes mencionada, es función de la concentración (entre otros factores) y en este caso linealmente, luego, a más concentración de glucosa más absorbancia. Esto se calcula en unos sencillos pasos, se hacen unos patrones de concentración conocida, en este caso de 0 (o blanco) y de 0,5 ; 1 y 2 mM (milimolar) y se pasan a incubar sobre la solución problema (el suero humano, y en este caso diluido 5 veces para tener valores adecuados) bajo la acción del complejo enzimático GDO- Peroxidasa y el calor de un termo.

Termo

Tras ésta incubación se pasa a medir sus absorbancia con el espectrofotómetro siendo las siguientes para los patrones : 0 (el blanco); 0,163; 0,310 ; 0,650 y para los problemas (siempre se trabaja doble y en este caso diluyendo la segunda para tener datos más correctos) las absorbancia salio: 0,370 y 0,199. Ahora, podemos hacer una curva de calibrado a partir de los patrones (concentración y absorción conocida) y extrapolar.

Glucosa Concentración / Absorbancia a 44mm

De la tabla saco que: el valor de concentración de glucosa en el suero es de 110,7 mg/dl, me permito no comentar los pasos de conversión, aunque si alguien se atreve a calcularlo el Peso molecular de la glucosa es 180 g/mol. El dato anterior se sale de los valores normales 60-100mg/dl, nuestro «paciente» sufre de hiperglucemia.

Actualmente estos metodos no se usan en análisis clínicos aunque es ilustrativo de como funciona esto de la espectrofotometria. Otro día pondre ejemplos más adecuados en base a la ley de Lamber-Beer.